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            溴乙酰溴雜質定性及檢出限試驗

              雖然溴乙酰澳供試品溶液中的雜質與二澳乙酸保留時間相同,但溴乙酸與二溴乙酸均無特征紫外吸收峰,無法通過DAD確認雜質為二溴乙酸。因此,取溴乙酰溴(批號為P1033548)供試品溶液進行液相色譜質譜聯用分析,流動相為0.01 mol/L醋酸銨緩沖液(用醋酸調至pH 5. 0)-乙腈(V:V=95:5),采用電噴霧離子源(ESI),負離子模式采集,結果見圖3。通過質譜分析測得,保留時間為3. 04 min 色譜峰, 138. 90[M+H]* :138. 90[ M+2+H]*=1:1為溴乙酸峰;保留時間為4.95 min色譜峰, 214.61 [ M +H]t :216. 91 I[ M+2+H]+ :218. 70[ M+4+H]* =1 :2:1為二溴乙酸峰;并且出現171.01[ M+H]+ :172. 86[ M+2+H]*:174.84[ M+4+H]*=1 :2:1為二溴乙酸脫去一-COOH后的碎片離子峰,進- -步確認其為二澳乙酸峰。

              溴乙酰溴線性關系 、校正因子和檢出限

              稱取各約25 mg溴乙酸和二溴乙酸對照品置于25mL容量瓶中,用水溶解并稀釋至刻度,再分別定量稀釋成每1 mL含溴乙酸和二溴乙酸各1.0.0.5.0.1、0.05. 0.01.0. 005.0. 002 0.001 mg的系列溶液,分別精密量取20 μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。配制不同濃度水平的標準系列溶液,以濃度c為橫坐標峰面積A為縱坐標,進行線性回歸,溴乙酸和二溴乙酸回歸方程分別為y= 63. 421x+0.025 7,R2=0. 999 8;y= 170. 53x-0.001 3,R*=0.9999。結果表明,溴乙酸和二溴乙酸在0. 001~1. 0 img/mL濃度范圍內線性關系良好。以溴乙酸和二溴乙酸的線性方程斜率計算二澳乙酸相對校正因子為0.37。因此,采用自身對照法或面積歸一化法計算雜質含量時,應添加校正因子進行計算。

            二溴乙酸檢出限( LOD)和定量限(L0Q)分別為4.613.5 μg/mL。以二溴乙酰溴與二溴乙酸分子量的比值計算檢出限(LOD)和定量限(L0Q)分別為6.717.4 μg/mL。取樣量為50mg,以檢出限和定量限計算二者含量分別為1. 34%3.48%。

             

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